DNA Spektrofotometreleri Konsantrasyon Nasıl Ölçer?
DNA ekstrakte edildiğinde, çoğu deneyin bir sonraki aşaması, girdi malzemesi olarak bilinen bir konsantrasyon gerektirir. UV absorpsiyonu, floresan boyalar ve elektroforez gibi DNA konsantrasyonunu ölçmenin birçok yolu vardır.
DNA spektrofotometreleri genellikle konsantrasyonu ölçmek için kullanılır ve bu makale nasıl çalıştıklarını ve neden kullanıldıklarını özetleyecektir.
DNA Spektrofotometreleri Ne İçin Kullanılır?
Spektrofotometri, DNA, RNA ve protein ölçümü ve kalite kontrolünü içeren bir dizi biyokimyasal deneyde kullanılan önemli bir yöntemdir. Bu uygulamalarda numuneler tipik olarak yalnızca küçük miktarlarda bulunur ve tahribatsız analiz tercih edilir. Bir mikro hacim spektrofotometre (bazen nano hacim veya nano damla spektrofotometreler olarak anılır) kullanmak, kantifikasyon için örnek kullanımını en aza indirir ve tipik olarak yalnızca 1µL örnek gerektirir.
DNA Spektrofotometreleri Nasıl Çalışır?
Spektrofotometri, bir malzemenin dalga boyunun bir fonksiyonu olarak iletim veya yansıtma özelliklerinin kantitatif ölçümü ile ilgili bir elektromanyetik spektroskopi biçimidir. DNA Spektrofotometreleri, bir ışık demetinin yoğunluğunu bir dalga boyu aralığında kaydeden dedektörler kullanır.
DNA spektrofotometreleri sıklıkla ultraviyole, kızılötesi ve görünür radyasyon için kullanılır, ancak elektromanyetik spektrumun diğer birçok öğesini de sorgulayabilirler. Dalga boyu aralığı (test örneğinden iletebileceği renkler), DNA spektrometrelerinin önemli bir özelliğidir. Ek olarak, numune iletim yüzdesi, numune emiliminin logaritmik aralığı ve bazen yansıtma ölçümünün bir yüzdesi bazı uygulamalar için önemli özelliklerdir.
Bir çözeltide, DNA spektrofotometreleri, bazlar tarafından emilen ultraviyole ışık seviyelerini ölçebilir. DNA ve diğer nükleik asitler, 260nm’lik bir tepe dalga boyunda ışığı emer. Absorbe edilen ışık miktarı numunedeki DNA konsantrasyonu ile orantılıdır. Konsantrasyon, Beer-Lambert denklemi kullanılarak iletilen ışık miktarından hesaplanır. DNA’yı bir spektrofotometre ile ölçmek için, DNA bir çözücü içinde süspanse edilmeli ve spektrofotometre, herhangi bir arka plan absorbansını düzeltmek için çözücü ile körleştirilmelidir.
Spektrofotometreler, son derece hassas, doğru ve sofistike cihazlardır ve laboratuvarlarda masaüstü veya model olarak veya saha çalışması için taşınabilir olarak kullanılabilir.
Kaynak: https://www.denovix.com/blog/how-dna-spectrophotometers-measure-concentration/
