Antikor Sayımı İçin En İyi Teknik Nedir?
Antikor kantifikasyonu, çeşitli monoklonal antikor sınıflarının tekrarlanabilir etiketlemesinde ve güvenilir şekilde tanımlanmasında önemli bir adımdır. Belirli uygulamalar için en iyi dilüsyonlar, spesifik antikorların etkili bir şekilde nasıl saflaştırılacağı ve hangi hücre dizilerinin en değerli sonuçları vereceği konusunda eyleme geçirilebilir bilgiler sağlar.
Numuneyi saflaştırmak için kullanılan tekniklere bağlı olarak toplam antikor konsantrasyonunun değerlendirilmesi zor olabilir, çünkü toplam sayımın yalnızca bir kısmı aktif antijen bağlayıcı antikorları içerecektir. Ek olarak, antikor miktarını ölçen moleküler bilim adamlarının kullanabileceği çeşitli deneysel yaklaşımlar vardır. Peki hangi teknik en iyisidir?
Antikor Bitiş Noktası Titrasyonu
Titrasyon, bilinmeyen çözünenlerin konsantrasyonunu ölçmek için kullanılır. Antikor konsantrasyonu, tipik olarak eşdeğerlik noktasını takiben – veya bu noktaya eşit – çözeltide bir kromatik değişiklik olan bir uç nokta ile gösterilir. Bu tekniğin avantajları olmasına rağmen, antikor titreleri, özellikle yüksek konsantrasyonlarda canlı olmayan veya düşük aviditeli antikorlar içeren numuneler için yanıltıcı olabilir.
Enzime bağlı İmmünosorbent Testi (ELISA)
ELISA kitleri, daha fazla tekrarlanabilirlik ve toplam antikor konsantrasyonlarının doğru ölçümlerini sundukları için ıslak kimya laboratuvarlarında büyük ölçüde son nokta titrasyonunun yerini almıştır. Bunlar, bir substrata eklendiğinde katalize olan raportör enzimlerle konjüge edilmiş bir antikor kullanarak spesifik analitlerin doğru miktarının belirlenmesine izin veren antikor-antijen bağlanması prensibi üzerinde çalışırlar. Yine, reaksiyon tipik olarak bir kromatik değişim ile gösterilir.
Geleneksel ELISA kiti genellikle klinik teşhis uygulamaları için altın standart olarak kabul edilir, ancak bu immünosorbent testinin doğrudan, sandviç ve yarışmalı ELISA kitleri dahil olmak üzere birçok formu vardır.
Bununla birlikte, sonuçların kesinliği tipik olarak, standart bir eğri içinde düşen numune dilüsyonlarının optik yoğunluğuna dayanan tek nokta enterpolasyonuna dayanır.
Spektrofotometri Yoluyla Antikor Kantifikasyonu
Spektrofotometri, 280 nm’de absorbansın bir fonksiyonu olarak antikor miktarını hızlı ve doğru bir şekilde gerçekleştirebilir. 280 nm’de spektrofotometrik absorbans yoluyla antikor miktarının belirlenmesi basit ve uygun maliyetli bir yöntemdir. Standart eğrilere veya tahlil reaktiflerine ihtiyaç duymadan doğru ölçümler elde etmek ve floresan etiketli antikorlar için boya katılımını değerlendirmek için spesifik sönme katsayılarını girme fırsatı sunar. Ek olarak kullanıcılar, spektrofotometrik antikor ölçümü için Bradford veya Lowry testleri gibi kolorimetrik testleri kullanabilir.
Kaynak: https://www.denovix.com/blog/what-is-the-best-technique-for-antibody-quantification/
