Analizleriniz İçin Hangi HPLC Dedektörü İdeal?
HPLC dedektörü çeşitliliği genellikle kafamızı karıştırır. HPLC dedektörleri rolü gereği HPLC’de önemli bir yere sahiptir. Yanlış dedektör seçersek, analitin konsantrasyonunu doğru göremeyiz veya ölçemeyiz. Bununla birlikte molekül yapımıza uygun olmayan bir dedektör seçimi hiç bir sinyal alamamamız gibi sonuçlar ile karşılaşmamıza neden olabilir.
Peki; HPLC dedektörlerinin türleri nelerdir? Farklılıkları nelerdir?
HPLC Dedektörü Türleri;
Bir saat satın almak istiyorsunuz ama klasik bir saat mi yoksa akıllı bir saat mi tercih etmeniz gerektiğine karar vereceksiniz. Saat seçerken öncelikli karar verme kriteriniz onunla hangi faaliyetleri ve hedefleri gerçekleştireceğiniz olacaktır. Çok aktif olduğunuzda gündelik rutininizi düzene sokmak için bir saate ihtiyacınız varsa ve günlük verilerinizi dijital bir ortamda depolamak ve izlemek istiyorsanız kesinlikle bir akılı saat seçmelisiniz. Bir akıllı saat sizin için klasik bir saatten daha kullanışlı olacaktır.
Tıpkı saat seçmek gibi HPLC dedektörlerinin de bir amacı vardır. HPLC dedektörleri farklı amaçlara hizmet eder. Bir dedektör seçmeden önce analitin ne olduğunu ve bileşiğin fizikokimyasal özelliklerini bilmeliyiz. Analiz edeceğimiz bileşiğin bulunabilecek en düşük oranlarını tahmin etmeliyiz.
Farklı ihtiyaçlar için farklı HPLC dedektörleri seçmeniz gerekir. Gelin HPLC dedektörlerini kısaca tanıyalım!
Charged Aerosol Detector / Yüklü Aerosol Dedektör (CAD)
CAD, çeşitli molekülleri analiz edebilir, ilaçları (küçük ve büyük moleküller), biyomolekülleri, yiyecekleri, içecekleri, polimerleri vb. ölçebilir. Bu tip HPLC detektörü, kromoforsuz analitleri saptayabilir. Ayrıca CAD, uçucu olmayan veya yarı uçucu analitleri saptayabilir. Aynı zamanda bir referans standardı olmaksızın bağıl ölçüm için de kullanılabilir. CAD’in diğer bir avantajı, diğer dedektör türlerinde sıklıkla bulunan kaymanın üstesinden gelmesidir. Bu dedektörün yüksek bir pikogram (pg) algılama limiti vardır.
Diode Array Detector / Diyot Dizi Dedektörü (DAD)
DAD yalnızca analitin saflığını veya safsızlık piklerinin elüsyonunu analiz etmek için kullanılır. Saptama sınırı nanogram (ng) cinsindendir. Kromoforlu analitleri tespit etmek için tek bir UV-Vis absorpsiyon detektörü kullanılır. Özellikle metot geliştirme çalışmalarında pik saflıklarını tespit etmek, en uygun dalga boyunu belirlemek gibi amaçlar için kullanılır. 3 boyutlu tarama yani spektrum alarak bileşiğin parmak izi denilebilecek karakteristik yapısını tanımlar. Bu sayede piklerin saflığını tespit edebiliriz.
Diyotun düzeni, tek bir dalga boyu yerine aynı anda birkaç dalga boyunu almayı mümkün kılar. Bu detektör, 3D formatında (3D alan edinimi) veri üretir. DAD, daha fazla hassasiyet ve neredeyse tekdüze bir yanıt sunar. Kirletici ve kalıntıların analizi için uygundur.
Variable Wavelength Detector / Değişken Dalga Boyu Dedektörü (VWD)
VWD, çoklu dalga boylarının emilimini ölçer. Tek LED ile VWD tespiti sağlayabilir. VWD tarafından analiz edilen analizlerin çalışma prensibi ve türleri DAD ile aynıdır. VWD’nin doğrusallığı ve sağlamlığı, DAD dedektörden daha yüksektir. Ek olarak, VWD dört dalga boyuna kadar es zamanlı analiz gerçekleştirebilir.
Bu tür HPLC dedektörünün bir nanogram algılama sınırı vardır. Bu nedenle, VWD kalite kontrol analizleri için daha uygundur. Hem VWD hem de DAD, kullanımı çok kolay ve uygun maliyetlidir.
Multiple Wavelength Detector / Çoklu Dalgaboyu Dedektörü (MWD)
MWD ayrıca VWD ve DAD gibi UV-Vis dedektörünün bir parçasıdır. Bu nedenle, analit numunesi bir kromofor içermelidir.
İlke, bir malzeme ile belirli bir ışık dalga boyu arasındaki etkileşimi kullanarak çalışır. Ancak alım frekansı sınırı yalnızca 100 Hz’e kadardır. VWD’den farklı olarak MWD, sekize kadar dalga boyunu es zamanlı analiz edebilir. VWD dedektörü LOD seviyeleri nanogram (ng) düzeyindedir.
Flourescene Detector / Floresan Dedektörü (FLD)
FLD’nin hassasiyet seviyesi, UV-VIS dedektörlerinden üç ila altı kat daha yüksektir. Bu nedenle FLD, birden çok dalga boyu çiftini aynı anda algılayarak çalışır.
Bununla birlikte, analit bir florofor içermeli, kontrol etmeli veya floresan olarak türevlendirilebilmelidir. FLD detektörünün LOD’si femtogramdan pikograma kadardır.
Refractive Index Detectors / Kırılma Endeksi Göstergeleri (RID)
RID, çözeltideki ışığın kırılmasına dayalı bileşenleri tanımlar. RID, mobil fazın kırılma indeksi ile numunenin sapması arasındaki farkı Snell yasasına göre ölçerek çalışır. Analiz edebildigi önemli bileşikler arasında zayıf kromofor grupları, şekerler ve polimerler bulunur.
RID için LOD mikrogram (μg) cinsindendir. Gradyan yöntemler için uygun değildir ve hassasiyeti de nispeten düşüktür. RID, analitleri kromofor grupların varlığına ihtiyaç duymadan analiz edebilir.
Mass Spectrometry / Kütle Spektrometresi (MS)
MS dedektörünün görevi, düşük pikogram (pg) tespit limitine sahip bileşikleri tespit etmek ve tanımlamaktır. Nano, mikro, kılcal ve analitik bileşikler gibi bileşikleri saptamak için farklı sıvı kromatografi akışlarını kullanır.
Bileşikleri kütle/yük oranlarına göre tespit eder ve MS çok hassas ölçümler gerçekleştirebilir. Bu nedenle bileşiklerin tespiti ve tespitinin kapsamı geniştir.
Conductivity Detectors / İletkenlik Dedektörleri
İletkenlik dedektörleri iyonlaşabilen bileşiler için ideal dedektörleridr ve ve iletkenlik ölçerler kullanılır. Biyofarmasötiklerin izolasyonunda ve antikor ve proteinlerin analizinde ve saflaştırılmasında kullanabilirsiniz.
HPLC dedektörlerinin doğru seçimi kesinlikle daha doğru bilgi gerektirir. Eğer karar vermekte zorlanıyorsanız Lab Akademi uzmanları ile info@labakademi.com adresinden iletişime geçebilir ve doğru dedektör seçiminde bir uzman görüsü alabilirsiniz.
Ekibimiz uygulamanız için doğru dedektör tipini bulmanıza yardımcı olacaktır.
